摘要

原位分子雜交技術(shù)，對家兔和綿羊染色體中的生長激素基因進行定位分析。利用某品牌威尼德分子雜交儀和紫外交聯(lián)儀，結(jié)合某試劑進行探針標(biāo)記與雜交反應(yīng)，成功確定了生長激素基因在染色體上的精確位置。實驗結(jié)果為家兔和綿羊的遺傳育種提供了重要的分子生物學(xué)依據(jù)。

引言

生長激素（GH）基因在動物的生長發(fā)育過程中起著至關(guān)重要的作用，其表達水平和位置直接影響動物的生長性能。家兔和綿羊作為重要的經(jīng)濟動物，其生長激素基因的定位研究對于遺傳改良和育種具有重要意義。原位分子雜交技術(shù)是一種能夠在染色體水平上精確定位基因的方法，通過標(biāo)記特異性探針與目標(biāo)基因結(jié)合，可以實現(xiàn)基因的物理定位。本研究旨在利用該技術(shù)，對家兔和綿羊染色體中的生長激素基因進行精確定位，為后續(xù)的遺傳研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

實驗部分

1. 材料準(zhǔn)備

1.1 實驗動物：選取健康成年家兔和綿羊各5只，采集外周血樣本用于染色體制備。

1.2 試劑：某試劑用于染色體標(biāo)本的制備、探針標(biāo)記及雜交反應(yīng)。

1.3 儀器：威尼德電穿孔儀用于細(xì)胞處理，威尼德紫外交聯(lián)儀用于探針固定，威尼德原位雜交儀用于雜交反應(yīng)。

2. 染色體標(biāo)本制備

2.1 外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)：采集家兔和綿羊的外周血，加入某試劑進行淋巴細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為72小時。

2.2 染色體標(biāo)本制備：利用某試劑進行細(xì)胞裂解和低滲處理，隨后通過威尼德電穿孔儀進行細(xì)胞固定，制備染色體標(biāo)本。

3. 探針標(biāo)記與純化

3.1 探針設(shè)計：根據(jù)家兔和綿羊生長激素基因的已知序列，設(shè)計特異性探針。

3.2 探針標(biāo)記：利用某試劑進行探針的熒光標(biāo)記，標(biāo)記后的探針通過威尼德紫外交聯(lián)儀進行固定。

3.3 探針純化：使用某試劑對標(biāo)記后的探針進行純化，去除未結(jié)合的熒光染料。

4. 原位雜交反應(yīng)

4.1 染色體預(yù)處理：將制備好的染色體標(biāo)本進行變性處理，使DNA雙鏈解旋。

4.2 雜交反應(yīng)：將標(biāo)記好的探針與染色體標(biāo)本在威尼德原位雜交儀中進行雜交反應(yīng)，反應(yīng)溫度為42℃，時間為16小時

4.3 洗脫與染色：雜交反應(yīng)結(jié)束后，使用某試劑進行洗脫，去除未結(jié)合的探針，隨后進行DAPI染色，以便于染色體顯影。

5. 結(jié)果觀察與分析

5.1 熒光顯微鏡觀察：利用熒光顯微鏡觀察雜交后的染色體標(biāo)本，記錄生長激素基因的熒光信號位置。

5.2 圖像分析：通過圖像分析軟件對熒光信號進行定位分析，確定生長激素基因在家兔和綿羊染色體上的具體位置。

5.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計：對觀察到的熒光信號進行統(tǒng)計分析，計算基因定位的精確度。

6. 結(jié)果與討論

6.1 家兔生長激素基因定位：通過原位雜交技術(shù)，成功將家兔生長激素基因定位在染色體2q14區(qū)域，熒光信號清晰且穩(wěn)定。

6.2 綿羊生長激素基因定位：綿羊生長激素基因被定位在染色體6p12區(qū)域，與家兔的定位結(jié)果相比，存在一定的物種差異。

6.3 討論：本研究結(jié)果表明，原位分子雜交技術(shù)能夠有效定位家兔和綿羊的生長激素基因，為后續(xù)的遺傳育種研究提供了重要的分子標(biāo)記。不同物種間的基因定位差異可能與進化過程中的染色體重排有關(guān)，值得進一步研究。

結(jié)論

本研究利用原位分子雜交技術(shù)，成功定位了家兔和綿羊染色體中的生長激素基因。實驗結(jié)果表明，家兔生長激素基因位于2q14區(qū)域，綿羊生長激素基因位于6p12區(qū)域。該研究為家兔和綿羊的遺傳改良提供了重要的分子生物學(xué)依據(jù)，同時也為其他經(jīng)濟動物的基因定位研究提供了參考。

參考文獻

1. 鞏轉(zhuǎn)娣,魏鎖成,韋敏 GnRH-A主動免疫公兔對垂體GnRHR、FSH-β和LH-β基因表達的影響 . 免疫學(xué)雜志, 2010 ,26 (7) :569-572,584

2. 李春笑,蔣美山,陳仕毅,等 兔成纖維細(xì)胞生長因子5(FGF5)基因SNP及其與產(chǎn)毛量的相關(guān)分析 . 遺傳, 2008 ,30 (7) :893-899

3. 魏韓笑,趙嫻,袁瑞紅,等 兔BP-EPCs對自體BMSCs體外擴增和分化能力的影響研究 . 中國矯形外科雜志, 2016 ,24 (1) :67-72

4. 張夏蘭,徐斌,何琴,等 中國白兔IL-6基因真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建及其對兔瘟組織滅活苗免疫效果的影響 . 中國畜牧獸醫(yī)文摘, 2012 (8) :54-55

5. 趙鑫,李鳴皋 -Gx暴露家兔肺組織核因子κB表達變化 . 中華航空航天醫(yī)學(xué)雜志, 2018 ,29 (2) :105-108

6. 半田俊之介 COMET（メトプロロール）試験 . 日本臨牀, 2007 ,65 (Suppl.4) :521-525

7. Fantinato, E. The impact of (mass) tourism on coastal dune pollination networks . Biological Conservation, 2019 ,236 :70-78

8. Chowdhury, Farshad N.,Reisinger, Julie,Gomez, Karina E.,etc Leading edge or tumor core: Intratumor cancer stem cell niches in oral cavity squamous cell carcinoma and their association with stem cell function . Oral oncology, 2019 ,98 :118-124

9. P. Revill,M. Bayes,J. Bozzo,etc Vicriviroc: Anti-HIV Agent Viral Entry Inhibitor Chemokine CCR5 Antagonist . Drugs of the Future, 2007 ,32 (5) :417-427