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分子雜交儀在基因組學(xué)研究中具有多方面的重要作用，主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：基因檢測(cè)與定位檢測(cè)特定基因序列：利用分子雜交儀可以將標(biāo)記的核酸探針與基因組DNA進(jìn)行雜交，通過(guò)檢測(cè)雜交信號(hào)來(lái)確定基因組中是否存在特定的基因序列。比如在檢測(cè)疾病相關(guān)基因時(shí)，能快速判斷樣本中是否攜帶特定的致病基因，為疾病的診斷和研究提供依據(jù)?；蚨ㄎ唬和ㄟ^(guò)熒光原位雜交（FISH）技術(shù)，在分子雜交儀的幫助下，可將特定的DNA探針與染色體進(jìn)行雜交，根據(jù)熒光信號(hào)在染色體上的位置，確定基因在染色體上的具體位置，對(duì)于研...
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摘要通過(guò)威尼德電穿孔儀構(gòu)建微毫秒級(jí)脈沖電場(chǎng)模型，探究其對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞DNA轉(zhuǎn)染效率的影響機(jī)制。采用熒光標(biāo)記質(zhì)粒定量分析轉(zhuǎn)染效果，結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)與qPCR驗(yàn)證基因表達(dá)水平，優(yōu)化電場(chǎng)參數(shù)（脈寬0.5–2ms，強(qiáng)度200–800V/cm）。實(shí)驗(yàn)表明，1.2ms/600V/cm條件下轉(zhuǎn)染效率達(dá)78.3%，細(xì)胞存活率高于85%，為新型非病毒載體技術(shù)開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。引言基因轉(zhuǎn)染技術(shù)是分子生物學(xué)研究的核心工具，傳統(tǒng)化學(xué)法（如脂質(zhì)體）與病毒載體存在效率低、免疫原性高等局限。脈沖電場(chǎng)介導(dǎo)的電...
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摘要電穿孔技術(shù)實(shí)現(xiàn)許旺細(xì)胞（Schwanncells）中人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶（hTERT）的高效轉(zhuǎn)染，探討其對(duì)細(xì)胞增殖與功能的影響。采用威尼德電穿孔儀優(yōu)化轉(zhuǎn)染參數(shù)，結(jié)合免疫熒光、qRT-PCR及Westernblot分析轉(zhuǎn)染效率及hTERT表達(dá)水平。結(jié)果顯示，電穿孔參數(shù)為電壓120V、脈沖時(shí)長(zhǎng)5ms時(shí)，轉(zhuǎn)染效率達(dá)78.3%，且細(xì)胞活性保持在85%以上，表明該方法可實(shí)現(xiàn)hTERT安全高效表達(dá)，為神經(jīng)再生研究提供技術(shù)參考。引言許旺細(xì)胞是周圍神經(jīng)系統(tǒng)的關(guān)鍵支持細(xì)胞，其增殖與遷移能力直接...
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摘要斑馬魚(yú)為模型，探索電穿孔技術(shù)對(duì)魚(yú)類尾鰭細(xì)胞及成熟配子的基因轉(zhuǎn)染效率優(yōu)化方法。通過(guò)威尼德電穿孔儀調(diào)控脈沖參數(shù)，結(jié)合某試劑預(yù)處理細(xì)胞，顯著提升了外源基因的導(dǎo)入效率。實(shí)驗(yàn)表明，優(yōu)化后的轉(zhuǎn)染方案可實(shí)現(xiàn)尾鰭細(xì)胞轉(zhuǎn)染率65%，配子轉(zhuǎn)染率40%，為魚(yú)類基因編輯提供了高效技術(shù)支撐。引言魚(yú)類作為模式生物在發(fā)育生物學(xué)和遺傳學(xué)研究中具有重要地位，其尾鰭細(xì)胞因再生能力強(qiáng)、易獲取等特點(diǎn)，成為體外基因功能研究的理想材料。然而，傳統(tǒng)顯微注射法在配子轉(zhuǎn)染中存在效率低、操作復(fù)雜等問(wèn)題，而電穿孔技術(shù)作為一種...
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摘要傳統(tǒng)離體神經(jīng)元轉(zhuǎn)染效率低、細(xì)胞損傷大的問(wèn)題，開(kāi)發(fā)了一種基于改良電穿孔技術(shù)的高效轉(zhuǎn)染方法。通過(guò)優(yōu)化電場(chǎng)參數(shù)與緩沖液體系，結(jié)合威尼德電穿孔儀與某試劑預(yù)處理，顯著提升了大鼠海馬神經(jīng)元轉(zhuǎn)染效率至85%以上，同時(shí)維持細(xì)胞存活率90%。該技術(shù)為神經(jīng)退行性疾病機(jī)制研究提供了可靠工具。引言海馬神經(jīng)元作為研究突觸可塑性與記憶機(jī)制的重要模型，其體外基因轉(zhuǎn)染效率直接影響功能研究的可靠性。傳統(tǒng)脂質(zhì)體法或病毒載體存在轉(zhuǎn)染率低（實(shí)驗(yàn)部分1.材料與設(shè)備細(xì)胞來(lái)源：新生SD大鼠（出生24h內(nèi)）海馬組織分離...
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摘要優(yōu)化綿羊誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSC）的電穿孔轉(zhuǎn)染效率。通過(guò)系統(tǒng)調(diào)整電壓、脈沖時(shí)間及質(zhì)粒濃度，結(jié)合威尼德電穿孔儀的參數(shù)設(shè)置，篩選出轉(zhuǎn)染效率與細(xì)胞存活率的組合。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，電壓300V、脈沖時(shí)長(zhǎng)5ms、質(zhì)粒濃度2μg/μL時(shí)，轉(zhuǎn)染效率達(dá)68.2%，細(xì)胞存活率80%。本方案為綿羊iPSC基因編輯研究提供了可靠的技術(shù)支持。引言綿羊誘導(dǎo)多能干細(xì)胞在畜牧育種、疾病模型構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物開(kāi)發(fā)中具有重要應(yīng)用價(jià)值。然而，其轉(zhuǎn)染效率受限于細(xì)胞膜通透性低及傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染方法（如脂質(zhì)體）的毒性問(wèn)題。電穿...
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摘要探究丙型肝炎病毒（HCV）非結(jié)構(gòu)蛋白4B（NS4B）對(duì)宿主細(xì)胞基因表達(dá)的影響。通過(guò)構(gòu)建NS4B真核表達(dá)載體，利用威尼德電穿孔儀轉(zhuǎn)染Huh-7細(xì)胞，結(jié)合轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)篩選差異表達(dá)基因（DEGs）。結(jié)果顯示，NS4B顯著調(diào)控細(xì)胞凋亡、免疫應(yīng)答及脂代謝相關(guān)通路。實(shí)驗(yàn)揭示了NS4B在HCV致病機(jī)制中的潛在作用，為抗病毒靶點(diǎn)開(kāi)發(fā)提供了理論依據(jù)。引言丙型肝炎病毒（HCV）感染是全球慢性肝病的主要病因之一，可導(dǎo)致肝硬化及肝癌。其非結(jié)構(gòu)蛋白NS4B作為病毒復(fù)制復(fù)合體的核心組分，參與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)...
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摘要分子克隆技術(shù)構(gòu)建雞Bcl2基因的重組表達(dá)質(zhì)粒，利用威尼德電穿孔儀轉(zhuǎn)染雞原代成纖維細(xì)胞，探究Bcl2過(guò)表達(dá)對(duì)細(xì)胞凋亡的調(diào)控作用。實(shí)驗(yàn)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，Westernblot驗(yàn)證Bcl2蛋白表達(dá)水平。結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞凋亡率顯著降低，表明Bcl2通過(guò)抑制凋亡關(guān)鍵通路發(fā)揮調(diào)控功能，為家禽抗病育種提供理論依據(jù)。引言Bcl2家族蛋白是細(xì)胞凋亡調(diào)控的核心因子，其中抗凋亡成員Bcl2通過(guò)抑制線粒體途徑的細(xì)胞色素C釋放，阻斷Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，從而維持細(xì)胞存活。在家禽疾...
